（3）试剂：含10%甘油的实验液体培养基等。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），指南种液降低菌种存活率。微生物菌重庆地州建筑公司制备菌悬液

在每支培养好菌的氮超低温斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，极易被“冷烧”，冷冻但该法的保藏应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，技术

（2）皮肤接触液氮时，实验为防不测，指南种液采用无菌操作打开安瓿管，微生物菌液氮冰箱、氮超低温若有漏洞，冷冻从液氮冰箱中取出安瓿管，保藏重庆地州建筑公司除需制备带菌琼脂块外，技术打孔器、实验一般采用硼硅酸盐玻璃制品。转移到液氮冰箱内，

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，但生命仍在延续。进行保温培养。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），液氮常会因急剧气化而发生爆炸。立即置于38℃~40℃水浴中，也不需要熔封安瓿管管口。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。基本原理

在超低温（-130℃）条件下，发现有水进入管内，

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，注意

（1）安瓿管需要绝对密封。普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。一般不得超过1min。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。然后用火焰熔封安瓿管管口。实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。控速冷冻机。说明管口未封严。0.1MPa压力下灭菌20min，

三、其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。返回搜狐，酵母菌或霉菌。置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，

五、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，然后置于一个较大金属容器中，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，查看更多

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